LightNing® AccI內(nèi)切酶是一系列經(jīng)過基因工程重組的快速限制性內(nèi)切酶，適用于質(zhì)粒 DNA、PCR 產(chǎn)物或基因組 DNA 等的快速酶切。所有 LightNing® 快速內(nèi)切酶在通用的 CutOne® 或 CutOne® Color Buffer 中都具有優(yōu)良的活性，能夠在 5~15 分鐘內(nèi)完成酶切。

產(chǎn)品型號：EG15502S

更新時間：2025-05-14

廠商性質(zhì)：經(jīng)銷商

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實驗試劑

細胞生物學試劑消毒劑酶類試劑分子生物學試劑細胞學產(chǎn)品試劑盒

產(chǎn)品介紹

LightNing® AccI內(nèi)切酶組成

組分	規(guī)格
LightNing® AccI	50 μl
10× CutOne® Buffer	1 ml
10× CutOne® Color Buffer	1 ml

特性和用法

LightNing® AccI內(nèi)切酶，可在5~15 min內(nèi)完成反應

建議反應條件

1× CutOne®緩沖液；

37℃溫育；

參照“DNA 快速酶切流程"配制反應體系。

失活條件

80℃溫育20 min。

甲基化敏感性

對于被 CpG 甲基化的 DNA，剪切可能受阻。

存儲條件

-20℃

相關問答

Q:為什么在CutOne® Buffer中加入HSA？

A:一些酶在反應過程中需要HSA的參與，我們在CutOne® Buffer中添加了HSA，避免反應中額外添加組分，使得酶切反應更加便捷。

Q:HSA的添加對于雷霆系列限制性內(nèi)切酶的功能會產(chǎn)生什么樣的影響？

A:在我們的測試中未曾發(fā)現(xiàn)HSA對于雷霆系列限制性內(nèi)切酶的功能有任何影響。在有些情況下，對于部分的酶切反應有促進作用。

Q:我需要嚴格遵守5~15 min的酶切時間嗎？能夠延長反應時間嗎？

A:雷霆系列限制性內(nèi)切酶經(jīng)過改造可以將酶切時間縮短至5~15 min。同樣也消除了限制性內(nèi)切酶的星活性（長時間反應造成的非特異性消化），在說明書中告知的星活性出現(xiàn)的時間范圍內(nèi)可以適當延長反應時間。

Q:我什么時候應當考慮星活性對于酶切反應的影響？

A:如果額外的酶切條帶對于實驗結果會產(chǎn)生影響時我們應當考慮星活性對于酶切反應的影響。例如：進行基因型、突變型分析或克隆時我們應當避免星活性的產(chǎn)生。避免星活性的有效方法：適當擴大反應體積（較小的反應體積容易造成甘油體積達到或超過總反應體積的5%）；不進行超長時間孵育（過夜消化極易產(chǎn)生星活性）。

Q:有哪些關鍵因素會導致星活性？

A:長時間孵育、過量的酶、高甘油含量（通常高于5%）、較小的反應體系等因素都會導致星活性的產(chǎn)生。

Q:未經(jīng)純化的PCR產(chǎn)物直接酶切要怎樣設定體系？

A:反應體系推薦由這些內(nèi)容組成：10 μl PCR產(chǎn)物、2 μl 10×CutOneTM Buffer、1~2 μl相應的限制性內(nèi)切酶、ddH2O補齊到30 μl。酶的用量根據(jù)PCR產(chǎn)物的濃度而定，只加入2 μl反應緩沖液的原因是PCR反應中存在對應的鹽離子和金屬離子，適當減少反應緩沖液的用量以保證最終反應體系中的環(huán)境適宜限制性內(nèi)切酶發(fā)揮功能。