瓊脂糖凝膠過濾基質樹脂填料 Smartaroe 蛋白純化

Smartarose是一種球形瓊脂糖凝膠過濾基質，Smartarose 4B和Smartarose 6B的瓊脂糖含量分別為4%和6%o Smartarose CL凝膠是 Smartarose 4B和Smartarose 6B的衍生物，化學和物理性能更優(yōu)異，流速更快。Smartarose CL凝膠耐有機溶劑，因此適合在有機溶劑 中分離物質。Smartarose和Smartarose CL分離范圍較廣，適合對分子量不同的樣品進行表征或分離。

瓊脂糖凝膠過濾基質樹脂填料 Smartaroe 蛋白純化性能

   pH范圍是我們根據(jù)實驗和經驗估算的。請注意：pH長期穩(wěn)定性是指凝膠在長時間內其層析性能不會改變的pH范圍。pH短期穩(wěn)定性是指凝膠再生和清洗時穩(wěn)定的pH范圍。

裝柱說明：

介質保存于20%乙醇。裝柱前建議將20%乙醇抽濾去除，置換成去離子水。

將75%介質和25%去離子水混句，真空負壓脫氣。不要使用粘性試劑裝柱。裝柱完成后，可以用粘性緩沖液低流速平衡層析柱。

2.2介質裝填

裝柱方法有兩步，第二步應在恒壓下進行，柱壓見表2。凝膠層析的分辨率隨柱床高度的增加而增加。因此，柱床高度最好在60 cm以上。

表2.推薦裝柱流速和壓力

V：所需介質體積ml

1.15：壓縮系數(shù)（不同介質壓縮系數(shù)不同）

r：柱管半徑cm

h：裝填高度cm

1） 用去離子水沖洗層析柱底篩板與接頭，確保柱底篩板上無氣泡，關閉柱底出口，并在柱底部留出1-2 cm的去離子水。

2） 將填料懸浮起來，小心的將漿液連續(xù)地倒入層析柱中。用玻璃棒沿著柱壁倒入漿液可減少氣泡的產生。

3） 如果使用儲液器，應立即在層析柱和儲液器中加滿水，將進樣分配器放置于漿液表面，連接至泵上，避免在分配器或進樣管中產生氣泡。

4） 打開層析柱底部出口，開啟泵，使其在設定的流速下進行。最初應讓緩沖液緩慢流過層析柱，然后緩慢增加至最終流速，這樣可避免液 壓對所形成柱床的沖擊，也可以避免柱床形成的不均勻。如果達不到推薦的壓力或流速，可以用你所使用泵的最大流速，這樣也可以得到 一個很好的裝填效果。（注意：在隨后的色譜程序中，不要超過最大裝柱流速的75%）當柱床高度穩(wěn)定后，在最后的裝柱流速下至少再上2 倍柱床體積的去離子水。標上柱床高度。

5） 關閉泵，關閉層析柱出口。

6） 如果使用儲液器，去除儲液器，將分配器置于層析柱中。

7） 將分配器推向柱子至標記的柱床高度處。允許裝柱液進入分配器，鎖緊分配器接頭。

8） 將裝填好的層析柱連接至泵或色譜系統(tǒng)中，開始平衡。如果需要可以重新調整分配器。

2.3柱效測試

為了檢驗層析柱的質量，應進行柱效測試，以確定理論塔板數(shù)和峰不對稱系數(shù)。

洗脫液：去離子水

樣品：2% （v/v）丙酮水溶液或者1 M NaCI溶液

如圖1所示計算理論塔板數(shù)，用如下公式：N/m = 5.54 （VrM）2 x 1000/L

計算峰不對稱系數(shù)（AS）公式如下：AS = b/a （如圖1所示）

3 .純化流程

3.1緩沖液的準備

所用水和緩沖液在使用之前建議用0.22 pm或0.45 pm濾膜過濾。

平衡液為蛋白純化后，用于保護蛋白的溶液，根據(jù)客戶需求自行選擇。

3.2樣品準備

樣品在上樣前建議離心或用0.22 pm或0.45|jm濾膜過濾，減少雜質，防止堵塞柱子。

3.3樣品純化

1） 平衡

上樣之前，用平衡液至少平衡兩個柱體積，或直到基線穩(wěn)定。含去垢劑的溶液可能需要平衡更長時間。

2） 上樣

推薦上樣體積為柱體積的2-5%o可以通過上樣管或樣品環(huán)來上樣。純化流速最高不能超過裝柱流速的70%0

3） 再生

再生通常用水沖洗2倍柱體積，然后用緩沖液沖洗2-3倍柱體積，如果不立刻使用，則用20%乙醇平衡后，4-30°C保存。對不同的樣品, 建議大約5次循環(huán)后，采用完整的在位清洗（CIP）o

4.清洗及保存

4.1 CIP （Cleaning In Place）清洗

CIP是去除以前生產過程中產生的結合過緊密、沉淀或變性的物質。在某些情況下，介質再生后，月謳或變性蛋白跡物質仍可育誡留茁掃=o 需要制鵰料中已知污染I刎樓來設H特定的CIP程序。

當出現(xiàn)下列情況，需要對介質進行在位清洗：

•柱壓增高；

•填料顏色變化明顯；

•分辨率降低；

•上接頭與凝膠表面之間出現(xiàn)空隙；

•如果反壓增高，在介質清洗前檢查閥門、管線等中止情況。

1） 去除非特異性結合蛋白和脂蛋白

用0.5 M NaOH清洗一個柱體積，去離子水或緩沖液平衡至中性，流速40 cm/ho

2） 去除一些沉淀或變性物質，建議使用下面的方法

用4倍柱體積的1.0-2.0 M NaOH溶液，流速40 cm/h對介質進行清洗，然后立即用2-3倍柱體積的水清洗。

3） 去除一些強結合的疏水蛋白

用4-10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗（使用有機溶劑要梯度清洗，避免起泡）或者用含去垢劑的酸或中性溶液。比如，用1 M 醋酸溶液含0.5%非離子型去垢劑，清洗流速40 cm/h。隨后用70%乙醇沖洗5個柱體積洗去殘留去垢劑。

4.2保存

CIP之后的介質如果不使用可以用20%乙醇，4 -30°C保存。

5 .訂購信息及相關產品

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